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      奶牛乳腺類器官培養基試劑盒

      奶牛乳腺類器官培養基試劑盒

      產品型號: WS001-100-KIT

      所屬分類:類器官培養基試劑盒

      產品時間:2023-03-24

      簡要描述:名稱:奶牛乳腺類器官培養基試劑盒

      貨號:WS001-100-KIT/WS001-500-KIT

      規格:100ml/500ml

      品牌:WinSera

      詳細說明:

      名稱:奶牛乳腺類器官培養基試劑盒

      貨號:WS001-100-KIT/WS001-500-KIT

      規格:100ml/500ml

      品牌:WinSera

      一、試劑盒組成:

      組分

      規格

      保存方法

      奶牛乳腺類器官培養基 A

      100ml

      4°C保存,3個月
      或-20°C保存,1年

      奶牛乳腺類器官培養緩沖液 B

      500ml

      4°C保存,3個月
      或-20°C保存,1年

      奶牛乳腺原代組織xiao化液 C

      30ml

      4°C保存,3個月
      或-20°C保存,1年

      類器官傳代消化液 D

      30ml

      4°C保存,3個月
      或-20°C保存,1年

      組織保存液 E

      100ml

      4°C保存,3個月
      或-20°C保存,1年

      類器官凍存液 F

      20ml

      4°C保存,3個月
      或-20°C保存,1年

      二、使用方法:

      1、 原代
      (1)取材后的奶牛乳腺組織須在 2-8℃含有組織保存液 E的取樣瓶中,快速轉運至潔凈實驗室進行組織處理和干細胞分離,拍照并登記信息。
      (2)準備若干培養皿,加入 4℃預冷的奶牛乳腺類器官培養緩沖液 B備用。
      (3)取樣瓶消毒,將組織放入培養皿中,利用奶牛乳腺類器官培養緩沖液 B清洗三次后,利用眼科剪或手術dao將腫瘤組織jian切成體積約為1-3mm3的組織塊。
      (4)組織用奶牛乳腺原代組織xiao化液 C消化,37℃震蕩消化10-20min,(消化過程中隨時觀察消化情況)。
      (5)取少量液體在顯微鏡下觀察,鏡下觀察到較多的單個細胞或 70um 以下的細胞簇后,加入三倍體積奶牛乳腺類器官培養緩沖液 B終止消化。
      (6)使用100um孔徑的篩網進行過濾,將濾液收集后,于300g富集離心5min后移去上清,添加奶牛乳腺類器官培養緩沖液 B重新重懸離心。
      (7)基質膠計算:第6步后觀察收集到的組織體積,添加25倍組織體積的基質膠重懸鋪板。
      (8)24孔細胞培養板為例,每孔點膠25ul組織基質膠混合物進行鋪板(4℃下操作)。
      (9)將鋪好的培養板放入37℃培養箱中10-15min成膠,添加奶牛乳腺類器官培養基 A(恢復室溫)進行培養。
      2、 類器官傳代培養
      (1)移液器吸去培養基,每孔添加1-2ml 4℃類器官緩沖液 B放置2min。
      (2)移液搶輕柔吹打基質膠,收集在15ml離心管中,4℃靜置10min。(每6-8孔為一組)
      (3)a. 類器官數量不足或體積較小時: 離心5min棄去上清,添加適量奶牛乳腺類器官緩沖液 B重懸移入1.5ml離心管,300g離心5min棄去液體進行第4步。
      b. 類器官數量較多或體積較大時:離心5min棄去上清,添加適量類器官傳代消化液 D消化2-3min,添加奶牛乳腺類器官緩沖液 B終止消化,離心5min棄去混合液,添加適量奶牛乳腺類器官緩沖液 B重懸移入1.5ml離心管,300g離心5min棄去液體進行第4步。
      (4)類器官收集后,添加基質膠重懸,每孔25ul基質膠鋪在24孔細胞培養板中,放置培養箱中10-15min添加500ul奶牛乳腺類器官培養基 A。
      3、類器官凍存
      (1)移液器吸去培養基,每孔添加1-2ml 4℃類器官緩沖液 B放置2min。
      (2)移液搶輕柔吹打基質膠,收集在15ml離心管中,4℃靜置10min。(每6-8孔為一組)
      (3)離心5min棄去上清,添加適量奶牛乳腺類器官緩沖液 B再次重懸,300g離心5min棄去液體。
      (4)添加適量類器官凍存液 F,輕柔吹打重懸,以24孔細胞培養板為例:密度為2個孔凍存1管,每管體積1.4ml。
      (5)做好標記信息,進行程序降溫后,移入液氮長期保存。
      4、 類器官復蘇
      (1)取10ml奶牛乳腺類器官培養緩沖液 B于15ml離心管中。
      (2)從液氮罐中取出凍存的類器官細胞,快速置于 37℃水浴鍋中融解。
      (3)水浴融解過程中,需輕輕搖動冷凍管,以確保凍存液在 1-2min內全部融解。
      (4)將溶解后的類器官細胞快速轉移至15ml 離心管,使用移液管輕輕吹打6-8次,300g 離心 5min,然后除去上清液并收集類器官細胞沉淀。添加適量奶牛乳腺類器官緩沖液 B重懸移入1.5ml離心管300g離心5min。
      (5)基質膠重懸,每孔25ul基質膠鋪在24孔細胞培養板中,放置培養箱中10-15min成膠,添加500ul奶牛乳腺類器官培養基 A。

      三、儲存/保存方法

      組分

      保存方法

      奶牛乳腺類器官培養基 A

      4°C保存,3個月或-20°C保存,1年

      奶牛乳腺類器官培養緩沖液 B

      4°C保存,3個月或-20°C保存,1年

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      溫馨提示:本產品僅作科研實驗使用,不支持臨床等研究




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